Читать курсовая по экологии: "Контаминация микотоксинами продукции и определение афлатоксинов в пшенице" Страница 12


назад (Назад)скачать (Cкачать работу)

Функция "чтения" служит для ознакомления с работой. Разметка, таблицы и картинки документа могут отображаться неверно или не в полном объёме!

Отбирают пипеткой 15 см³ (V4) второго фильтрата (V3) в емкость для растворителя IA колонки. Пропускают его через разделяющую колонку, затем промывают колонку, как это описано в инструкциях производителя, и удаляют элюаты. Начинают проводить элюирование афлатоксинов. Собирают этанольный или ацетонитрильный элюат (в зависимости от продукта или инструкций производителя) в мерной колбе вместимостью 2 см³ (или другого объема, установленного производителем). Разбавляют до метки водой (V5).

Методы ввода в IA колонки, промывания и элюирования немного отличаются, в зависимости от производителя колонки, и необходимо четко следовать конкретным инструкциям, прилагаемым к колонкам.

Примечание: в целом, процедуры включают экстракцию образца смесью метанола и воды, фильтрацию или центрифугирование, возможное разбавление образца раствором фосфатного буфера или водой, загрузку под давлением в предварительно промытую колонку, промывку колонки дистиллированной водой и элюирование афлатоксинов метанолом или ацетонитрилом (в зависимости от продукта и инструкций производителя).

Допускается использовать традиционные колонки с силикагелем или колонки твердофазной экстракции. В этих случаях также необходимо четко следовать инструкциям производителя. Если растворитель, применяемый для элюирования афлатоксинов, не совместим с подвижной фазой, то элюат необходимо выпарить до сухого остатка в токе азота при температуре ниже 40°С. Остаток необходимо растворить в подвижной фазе и разбавить до 2 см³ или до того объема, который установлен производителем.

Необходимо предусмотреть, чтобы максимальная емкость колонки не была превышена [1].

Условия работы при выполнении ВЭЖХ

Выход разделительной колонки подсоединяют к одному ответвлению тройника системы послеколоночной дериватизации с помощью короткого фрагмента системы труб с внутренним диаметром, например, 0,25 мм. Ко второму ответвлению тройника подсоединяют выход насоса, который поставляет реагент для послеколоночной дериватизации. Один конец витка труб из политетрафторэтилена или нержавеющей стали присоединяют к третьему ответвлению тройника и другой конец присоединяют к детектору. Используя термостат или водяную баню, поддерживают температуру реакционного змеевика на уровне 70°С.

В случае использования колонки, подходящими являются следующие параметры:

скорость потока подвижной фазы (колонка): 1,0 см³/мин;

скорость потока послеколоночного реагента: 0,3 см³ /мин;

впрыскиваемый объем: 50 мкл.

Дают всей системе функционировать 10-20 мин для ее стабилизации. Если используется интегратор, настраивают регулировку чувствительности флуоресцентного детектора или интегратора, чтобы получить соответствующий сигнал: шум 5: 1 для 0,125 нг афлатоксина G2 в 50 мкл. Если используется регистрирующий прибор с ленточной диаграммой, настраивают регулировку флуоресцентного детектора таким образом, чтобы получить для 0,125 нг афлатоксина G2 в 50 мкл от 30% до 40% шкалы регистрирующего прибора [1].

Идентификация

Проводят идентификацию каждого пика афлатоксина на хроматограмме образца путем сравнения значений времени удерживания со значениями соответствующих стандартов.

Афлатоксины можно идентифицировать одновременным вводом раствора испытуемой пробы



Интересная статья: Быстрое написание курсовой работы