Читать курсовая по биологии: "Фітогормони" Страница 3

(Назад) (Cкачать работу)

розчинна в гарячій воді. ІОК швидко розкладається в кислому середовищі і при наявності окисників , наприклад H2O2. В лужному середовищі більш стабільна.

рис.1.1Індолілоцтова кислота — головний природний ауксин — швидко розщеплюється ферментом індолацетатоксидазою. Активність цього ферменту гальмує деякі ортодифеноли. Стимулююча дія ортодифенолів на ріст була відома досить давно, і спочатку вважали, що ці речовини і є ауксини; насправді ж їх стимулююча дія пояснюється тим, що вони пригнічують активність індолацетатоксидази, а це веде до підвищення вмісту в тканинах рослини ендогенної індолілоцтової кислоти[3].

1.2.Методи аналізу індольних ауксинів

Для виділення індольних ауксинів з тканин рослинні об’єкти фіксують рідким азотом і ліофілізують або безпосередньо використовують для екстракції.Екстрагування ауксинів звичайно проводять протягом 2 годин при 0◦С кількома порціями підкисленого сірчаного ефіру, вільного від перекисів. Ефір з екстракту відганяється. Водний залишок піддають додатковому очищенню. Ауксини з водного екстракту витягують ефіром і потім концентрують шляхом відгонки ефіру.

Для подальшої очистки використовують метод паперової або тонкошарової хроматографії. Ідентифікацію ІОК і інших індольних сполук на хроматограмі проводять по величині Rf двох-трьох системах розчинників , по кольоровим реакціям і по біопробі.

Елюати з зон хроматограми використовують для біотестів. Простим і надійним біологічним методом виявлення ауксинів є метод прямого росту відрізків колеоптилів вівса , пшениці чи кукурудзи з видаленою верхівкою. Цей метод дозволяє виявити ІОК в межах 10-7-10-4 М.

Надійність аналізу ІОК зростає при використанні хімічних тестів: реактивів Сальковського, Ерліха, Прохазки з якими індольні сполуки дають комплекси різного кольору. Так як і деякі інші природні сполуки дають кольорові реакції з цими реактивами ,то необхідно застосовувати 2-3 хімічних тести для ідентифікації ауксина.

Біологічні методи дають можливість кількісно виявити вміст ауксинів в рослинних тканинах.Для цієї мети слугують також і хімічні кількісні методи.Для колориметричного методу використовують реактив Сальковського (0.01 М FeCl3 в 35%-ій HClO4) ,реактив Ерліха(2г n-диметиламінобензальдегіда в 100мл 2,5 н HCl). Однак чутливість цих методів невелика ,порядку 3*10-6-3*10-4ІОК. Для виявлення кількості індольних ауксинів колориметричним методом необхідно кілька сот грамів сирої маси тканини[2]. 1.3.Біосинтез ІОК

Амінокислота триптофан звичайно розглядається як попередник ІОК. Триптофан під дією трансамінази може перетворюватися в індоліл-3-піруват (рис.1.3.1.). Цей шлях вимагає присутності кетокислот і піридоксальфосфату. Ін-долілпіруват декарбоксилюється за участю декарбоксилази і тіамінпірофосфату до індоліл-3-ацетальдегіда. Альдегіддегідрогеназа, коферментом якої є НАД, окисляє індоліл-3-ацетальдегід до ІОК.

Інший шлях утворення ІОК включає декарбоксилювання триптофану з утворенням триптаміна. Потім триптамін під дією аміноксидази перетворюється в індолілацетальдегід, який окислюється до ІОК.

Згідно деяким даним, триптамін може утворюватися з індола, а потім перетворюватися в ІОК по вже описаному механізму. Індоліл-3-етанол під дією етанолоксидази швидко перетворюється в індол або