Читать реферат по финансовому менеджменту, финансовой математике: "Техника жидкостной, колоночной хроматографии" Страница 3


назад (Назад)скачать (Cкачать работу)

Функция "чтения" служит для ознакомления с работой. Разметка, таблицы и картинки документа могут отображаться неверно или не в полном объёме!

то для поддержания постоянной скорости течения жидкости через колонку можно воспользоваться простым устройством, именуемым «колбой Мариотта». Пробка, через которую проходят две трубочки должна плотно закрывать колбу с рабочей жидкостью («элюентом»). В этом случае скорость истечения элюента из колбы не будет изменяться, — несмотря на понижение уровня жидкости в ней, — до тех пор, пока этот уровень не опустится до нижнего конца вспомогательной трубочки, по которой воздух попадает в пространство над уровнем жидкости в колбе. Дело в том, что вплоть до этого момента сумма давлений воздуха под пробкой и столба жидкости над нижним концом вспомогательной трубочки остается неизменной — равной атмосферному давлению. Отрегулировать скорость протекания жидкости через колонку можно положением конца петли, подсоединенной к ее выходу, как это показано на рис. 2 б.

Рис. 2

Скорость протекания жидкости через колонку («скорость элюции») будет определяться гидравлическим напором — разностью уровней «Н».

Как будет видно из дальнейшего, при хроматографическом разделении веществ в большинстве случаев используют градиентную элюцию колонок с линейным (или нелинейным) изменением содержания активного компонента в элюирующей жидкости. Эти градиенты образуются точно таким же образом (комбинацией смеситель — резервуар), как это было описано для создания градиента концентрации сахарозы при ультрацентрифугировании.

д) Внесение препарата на колонку

Исходный препарат в большинстве случаев вносят в хрома-тографическую колонку растворенным в том же буфере, каким «уравновешена» сама колонка. Надо проследить за тем, чтобы раствор препарата был прозрачен, свободен от частиц или пыли. При необходимости его следует «осветлить» центрифугированием или отфильтровать.

В открытую колонку препарат вносят вручную, из пипетки. Начинают с того, что спускают жидкость из колонки так, чтобы открылся, но не начал обсыхать верхний слой гранул. Сливную трубку зажимают. Раствор препарата осторожно, чтобы не взмутить гранулы, заливают из пипетки по стенке колонки, начиная от расстояния в 1 мм над поверхностью гранул и постепенно, вместе с уровнем препарата, продвигая кончик пипетки вверх по стенке. После того, как весь объем препарата внесен в колонку, сливную трубочку освобождают от зажима и дают слою препарата войти полностью в верхний слой гранул. Таким же образом вносят объем элюента, равный объему препарата, а затем запускают и его в гранулы. Такую промывку стенок колонки целесообразно повторить еще раз. Наконец заливают еще элюент на высоту 1-2 см и вставляют верхнюю пробку с капельницей. Слой свободного элюента над гранулами нужен для того, чтобы предотвратить обнажение верхней поверхности слоя гранул при неработающем насосе и открытом сливе из колонки. (В первый момент после открытия слива некоторое количество жидкости должно вылиться, чтобы под верхним колпачком колонки образовалось разрежение, прекращающее дальнейший слив жидкости.)

Вместе с тем, следует иметь в виду, что в случае градиентной элюции в свободном слое элюента над гранулами происходит перемешивание градиента. Поэтому в этом случае высота свободного слоя жидкости над гранулами должна быть минимально необходимой. После того, как внесение препарата и



Интересная статья: Основы написания курсовой работы