Читать доклад по химии: "Содержание глутаминовой кислоты в камерной влаге у больных первичной открытоугольной глаукомой" Страница 2

(Назад) (Cкачать работу)

Учитывая вышесказанное, целью нашего исследования явилось обнаружение глутамата у больных ПОУГ.

Материалы и методы исследования

Опытную группу составили 10 больных ПОУГ (6 мужчин, 4 женщины, средний возраст – 74 года), у которых забиралась камерная влага во время экстракапсулярной экстракции катаракты с антиглаукоматозным компонентом. 8 больных были с развитой стадией ПОУГ, 2 с далекозашедшей. Контрольную группу составили больные со старческой катарактой – 14 пациентов (11 мужчин, 3 женщины, средний возраст – 68 лет). Основная и контрольная группы были сопоставимы по возрасту и сопутствующим соматическим заболеваниям.

В основу метода положены описанные Боде и Гири методы количественного определения аминокислот в виде медных производных с нингидридином после хроматографического их разделения на бумаге в нашей модификации [1].

1. Подготовка пробы для анализа. Пробы камерной жидкости объемом 0,1–0,2 мл взвешивают на аналитических весах, упаривают досуха на водяной бане при 40°С в стеклянных микрочашках, используя плавающий штатив. Сухой остаток растворяют в 0,05 мл дистиллированной воды.

2. Получение одномерных хроматограмм камерной жидкости глаза. 20 мкл полученных растворов порциями по 5 мкл с помощью автоматической пипетки наносят на хроматографическую бумагу марки «быстрая» размером 2 x 27 см. Хроматографирование проводят нисходящим методом два раза в одном направлении сначала в смеси растворителей I, затем два раза в смеси II. Смесь I: н–бутиловый спирт, ледяная уксусная кислота, дистиллированная вода (4 : 1 : 5). Смесь II: н–бутиловый спирт, ледяная уксусная кислота, дистиллированная вода (40 : 15 : 5). После каждого пропускания растворителя бумагу высушивают на воздухе и снова помещают в хроматографическую камеру. Время прохождения растворителя в одном направлении 7 часов. Высушенную хроматограмму погружают на несколько секунд в 0,5% раствор нингидрина в ацетоне, просушивают в течение нескольких минут на воздухе и подогревают 10 минут в сушильном шкафу при 50°С для развития окраски. Пятна аминокислот становятся более четкими через сутки, поэтому определение количественного содержания аминокислот следует проводить на следующий день.

3. Количественное определение глутаминовой кислоты в камерной жидкости глаза. Фиолетовые пятна, соответствующие глутаминовой кислоте, вырезают, разрезают на мелкие кусочки и помещают в микропробирки, содержащие 0,25 мл спиртового раствора сульфата меди. Фиолетовая окраска переходит в оранжево–красную в результате образования медного производного аминокислот с нингидрином. Экстракцию продолжают в течение одного часа при комнатной температуре. Интенсивность окраски измеряют на фотоэлектроколориметре Humalyzer 2000 при длине волны 505 нм в микрокюветах против контрольной пробы на бумагу. Расчеты по содержанию аминокислоты проводят по калибровочному графику, полученному со стандартными растворами глутаминовой кислоты.

4. Построение калибровочного графика. Готовят растворы глутаминовой кислоты 0,001 М, 0,00075 М, 0,0005 М, 0,000375 М, 0,00025 М. На бумагу наносят по 20 мкл растворов. Расчет производят по формуле:

А = (С x 5 x 10–2)/V

А – концентрация глутаминовой кислоты в камерной влаге (мкг/мл); C – содержание

Похожие работы